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瓶栽杏鮑菇菌種制作技術淺析
作者:    來源:上海農業網    點擊數:   文章發布時間:2017年07月21日 【字體:

瓶栽杏鮑菇菌種制作技術淺析

周峰,李正鵬,尚曉冬,宋春艷,李巧珍,譚琦,李玉*
(上海市農業科學院食用菌研究所,農業部南方食用菌資源利用重點實驗室,國家食用菌工程技術研究中心,國家食用菌加工技術研發分中心,農業部應用真菌資源與利用重點開放實驗室,上海市農業遺傳育種重點開放實驗室)
《安徽農學通報》 2017年第10期

  杏鮑菇(Pleurotus eryngii(DC:Fr.)Quèl.),學名刺芹側耳,被稱為“平菇王”、“干貝菇”,前蘇聯的瓦西爾柯夫(1955)稱它為“草原的美味牛肝菌”。因為子實體具有杏仁的香味和鮑魚的口感,被稱為杏仁鮑魚菇,簡稱杏鮑菇。
  日、韓等國杏鮑菇工廠化生產主要采用瓶栽模式,子實體菇體潔白,菌肉緊實,菇帽大、口感好。目前,國內杏鮑菇工廠主要采用墻式袋栽模式,雖菇大產量高,但柄長帽小,質地松軟,口感差。隨著國內消費品質的提高,瓶栽杏鮑菇產品將會越來越受到消費者的青睞。瓶栽杏鮑菇可出口歐洲、美國和東南亞等地,價格是袋栽產品的1倍左右。此外,瓶栽杏鮑菇機械化程度和生產效率高,在勞動力成本上升的未來,瓶栽杏鮑菇將是杏鮑菇栽培發展的趨勢。
  1 栽培菌株
  國森1號,2011年上海市農業科學院食用菌研究所雜交后系統選育。親本為中國農業微生物菌種保藏中心上海食用菌分中心保藏,編號“長野”和“廣杏”。國森1號特征為菌柄白色,菌蓋灰黑色,生長速度較快;菌蓋灰色且平均直徑略大于菌柄為4.59cm,邊緣整齊;菌褶白色;菌柄平均長度7.39cm,平均直徑3.17cm,色澤雪白,口感脆嫩。“國森1號”菌絲最適生長溫度為23~25℃;最適出菇溫度為16±1℃,在14~18℃出菇正常;催蕾需要較高濕度,耐受菇房高CO2濃度。適宜杏鮑菇瓶栽工廠化企業推廣應用。
  2 固體菌種制作
  杏鮑菇固體菌種一般由母種、三角瓶固體菌種、原種栽培種逐級擴繁而成,制種周期長,勞動強度大、工藝繁瑣,但技術要求較低,菌種耐儲藏,一般適合小規模工廠化企業使用。
  2.1 母種 母種培養基,一般采用PDA培養基,馬鈴薯(去皮)200g,葡萄糖20g,瓊脂條(粉)18~20g,水1000mL,pH自然。可適當提高培養基營養成分,菌絲生長速度比普通PDA更快。
  配制培養基,馬鈴薯要新鮮,勿選長出嫩芽的,因長芽的地方含有龍葵毒素。葡萄糖、瓊脂粉等藥品選用質量好,雜質少的,偽劣藥品制作的培養基菌絲生長慢、活力差,影響母種質量。因此,為了保證母種質量,生產企業一般購買進口培養基生產母種。
  試管母種從4℃冷藏箱中取出,22~24℃培養箱內活化12~24h,然后轉接平皿。平皿菌種生長至整個平皿90%時,再轉接1~2次,菌絲活力恢復后接種三角瓶。平皿菌種一般需要培養12~14d。
  2.2 三角瓶固體菌種 配方:木屑78%~82%,麩皮15%~20%,蔗糖1%,石灰1%,輕質碳酸鈣1%,含水量56%~58%。
  培養基配好,裝瓶,250mL三角瓶裝料140~150g,中心打接種孔,高溫高壓滅菌,冷卻后超凈工作臺內接種。平皿菌種用1cm孔徑的打孔器打孔,每瓶接種4~5塊。接種孔接種2~3塊,縮短發菌周期。接種后放入菌種室22℃左右恒溫培養。一般培養18~20d,長滿后熟2~3d,可擴繁原種。
  若不制作三角瓶固體菌種,直接使用母種接原種,此法母種需求量大,且發菌周期長,封面慢,污染率高,不推薦使用。
  2.3 原種和栽培種 原種和栽培種的配方同三角瓶固體菌種。培養基配好后,使用聚丙烯菌種瓶,裝瓶機自動裝瓶、打孔、蓋瓶蓋,1100mL的菌種瓶,每瓶裝料680~750g。高溫高壓滅菌,凈化車間冷卻后,在FFU層流罩下接種。接種后放入菌種室22℃左右恒溫黑暗培養,期間挑雜2~3次。根據裝料量和顆粒度不同,一般培養25~30d,長滿后熟2~3d可使用。每瓶三角瓶固體菌種可以接原種8瓶,每瓶原種可接栽培種24~32瓶。使用固體接種機,每瓶栽培種可接栽培瓶24~32瓶。
  3 液體菌種制作
  液體菌種制作是在發酵罐中,采用液體培養基通入無菌空氣并加以攪拌,以增加培養基中溶解氧含量,并控制發酵工藝參數,獲得大量菌種。液體菌種具有制種周期短、接種效率高、定植封面快、發菌周期短、菌齡一致、污染率低和生產成本低等優點,適合食用菌規模化、工廠化生產,已成為食用菌制種產業的發展趨勢。利用液體菌種與固體菌種進行杏鮑菇栽培試驗,結果表明液體菌種栽培比固體菌種栽培更具有優勢,除發菌快、菌齡縮短外,液體菌種出菇整齊、轉潮快、畸形菇率低,品質檔次較高[6]。目前,福建嘉田農業開發有限公司、浙江麗水百興菇業有限公司等大型企業均使用液體菌種栽培杏鮑菇。杏鮑菇液體菌種的制作流程與金針菇等品種相似,也是由母種接種到三角瓶,三角瓶菌種放置在搖床上進行培養;三角瓶菌種培養好后,接種到發酵罐,通入無菌空氣培養;發酵結束,通過液體接種機進行接種,然后培養,出菇。
  3.1 母種 杏鮑菇液體菌種母種的制作同2.1。
  3.2 三角瓶液體菌種 杏鮑菇液體菌種培養基最適起始pH為6左右,最適氮源為酵母粉與豆餅粉,最適碳源為葡萄糖[7]。三角瓶液體菌種用于擴繁發酵罐液體菌種,菌絲量比發酵罐大,因此,培養液營養一般比發酵罐高。培養液配方,黃豆餅粉60g/L,蛋白胨3g/L,葡萄糖20g/L,磷酸二氫鉀0.5g/L,硫酸鎂0.5g/L,VB10.01g/L[8];白砂糖20g/L,豆粕粉3g/L,酵母浸粉2g/L,磷酸二氫鉀0.8g/L,硫酸鎂0.7g/L[9];配制培養液時,豆粉等加水后容易出現絮狀沉淀,分裝不均勻,因此豆粉等需要逐瓶添加,而不能溶水后再分裝。
  培養液配好,每瓶加入一粒磁力攪拌轉子,高溫高壓滅菌,冷卻后接種。平皿菌種用3~5mm孔徑的打孔器打孔,每瓶接種菌種4~6塊。放入搖床22~24℃恒溫培養,轉速120~160r。一般培養6~8d,培養結束用磁力攪拌器將菌球打碎,然后接種發酵罐。
  3.3 空氣處理系統 室外空氣必須經過除水、除油、除菌和控溫等程序,進行嚴格處理后才能通入發酵罐。一般處理程序為,空氣壓縮機-儲氣罐-Q級-冷凍式干燥機-P級-S級-吸附式干燥機-P級-S級-不銹鋼細菌過濾器-發酵罐。根據發酵罐大小和數量,確定用氣量,然后選擇相應功率的空氣壓縮機、儲氣罐、冷凍式干燥機、吸附式干燥機和過濾器。空壓機一般選用螺桿式空壓機,運作平穩,故障率低。儲氣罐和過濾器需安裝自動排水器,每天人工檢查和排水一次,確保管道內的油、水及時排出。過濾器的濾芯和吸附式干燥機內的干燥劑根據使用情況,定期更換。
  3.4 發酵罐菌種的制作 培養液配方,白砂糖20g/L,豆粕粉3g/L,磷酸二氫鉀0.6g/L,硫酸鎂0.6g/L。發酵罐培養液與三角瓶菌種配方基本一致,還需添加少量消泡劑。根據配方,將各營養成分加入到水桶等容器內,加水充分攪拌,然后過篩加入發酵罐中。將發酵罐推入滅菌器內高溫高壓滅菌,滅菌結束后拉入冷卻間,通氣保持罐內正壓,淋水冷卻。冷卻后拉入接種室,在FFU層流罩下通氣正壓接種。接種后通入無菌空氣培養。一般培養8~9天,結束后使用液體接種機接種到栽培瓶。
  菌絲在培養過程中,前3d菌絲量增長緩慢,第4天開始快速增長,從第4天到第8天菌絲量每天的增長量維持在0.05g/100mL以上,第9天之后菌絲量增長速度開始緩慢,菌絲量也逐漸趨于平穩,到了培養后期,菌絲量開始略微有所下降。杏鮑菇發酵罐培養菌絲量變化規律基本上符合生物界群體增長的“S”型曲線。
  從第2天到第4天CO2濃度基本維持在400~650mg/kg范圍內,第4天之后隨著菌體生長進入對數期,呼吸產生更多的CO2。第8天到第11天,CO2濃度維持在1700mg/kg以上,此時菌體生長處于穩定期,細胞產生數量與衰亡數量基本持平,CO2濃度也趨于穩定。從11d以后CO2濃度有下降的趨勢,這也表明菌體生長進入了衰亡期。
  培養期間CO2濃度變化曲線與菌體生長的調整期、對數期、穩定期和衰亡期相符合,如果某個時期CO2濃度突然異常升高,則可能是雜菌的污染,一般是細菌,此時發酵罐培養液作廢并及時清理。因此在生產中,CO2濃度可作為發酵罐培養液是否正常生長的一個輔助指標,測得CO2濃度在1700mg/kg以上時為對數生長期,即接種時期。發酵罐液體培養在接種初期pH為6.26,在培養的初期即前三天,pH基本不變,維持在6.2以上,第4天后隨著菌絲體快速生長,代謝產物有所積累,pH略有下降,第9天下降至6.1以下,隨著菌體生長進入穩定期與衰亡期,代謝產物或分泌物的積累,pH下降速度變快,第11天開始下降到6以下,第15天已下降至4.85左右。從培養開始到結束pH變化在0.5以內。

  常用計量單位符號 1、時間:d(天)、h(小時)、min(分)、s(秒)。 2、長度:km(千米)、m(米)、cm(厘米)、mm(毫米)。 3、面積:m2(平方米)、667m2(畝)、hm2(公頃)。 4、體積:m3(立方米)、L(升)、ml(毫升)、μl(微升)。 5、質量:t(噸)、kg(公斤 千克)、g(克)、mg(毫克)、μg(微克)。 6、濃度:mg/L、mg/kg(ppm,1×10-6)。

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